Purificación, caracterización y evaluación de la actividad antivibrio de una fosfolipasa A2 de Bothrops Asper

Abstract

La resistencia bacteriana en enfermedades infecciosas como la vibriosis en el camarón blanco (Litopenaeus vannamei), ha impulsado la búsqueda de estrategias más eficiencias para combatir esta enfermedad en el sector acuícola. Una alternativa para solucionar esta problemática es la búsqueda de nuevos compuestos antimicrobianos, a partir de las toxinas derivadas del veneno de serpientes ecuatorianas. Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue purificar y caracterizar un homólogo de la fosfolipasa A2 (PLA2 Lys-49), presente en el veneno de Bothrops asper y evaluar su efecto antimicrobiano en cepas de Vibrio spp. La toxina se purificó y caracterizó a través de cromatografía líquida de alta eficiencia en fase reversa (RP-HPLC) y SDS-PAGE en condiciones reductoras. Debido a su naturaleza monomérica, se observó una masa molecular cercana a los 14 kDa. Luego, se confirmó mediante cromatografía líquida de ultra eficiencia acoplada a espectrometría de masas, obteniéndose una masa molecular de 13.649,17 Da. Mediante la secuenciación parcial de los fragmentos peptídicos se identificaron 82 residuos de aminoácidos que mostraron tener alta similitud con otras fosfolipasas básicas A2 (PLA2 Lys-49) del género de Bothrops. También, mediante un predictor peptídico (AMPfun), se encontraron dos péptidos con un alcance mayor al 0,9 demostrando tener alto potencial antimicrobiano. En los ensayos preliminares in vitro, se evaluó la actividad antivibrio mostrando una inhibición del 85% contra cepas Gram negativas de Vibrio harveyi, V. parahaemolyticus y V. vulnificus; indicando una alta susceptibilidad al estar expuesta a una concentración de 250 μg/mL de PLA2 Lys-49. Por ende, mediante esta investigación se podrían desarrollar nuevas alternativas terapéuticas en el sector acuícola.